{"id":44201,"date":"2026-04-28T08:19:56","date_gmt":"2026-04-28T08:19:56","guid":{"rendered":"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/?p=44201"},"modified":"2026-04-28T08:26:20","modified_gmt":"2026-04-28T08:26:20","slug":"sherlock-el-detective-molecular","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/sherlock-el-detective-molecular\/","title":{"rendered":"SHERLOCK, el detective molecular"},"content":{"rendered":"\t\t<div data-elementor-type=\"wp-post\" data-elementor-id=\"44201\" class=\"elementor elementor-44201\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t<section class=\"elementor-section elementor-top-section elementor-element elementor-element-e5e108d elementor-section-boxed elementor-section-height-default elementor-section-height-default\" data-id=\"e5e108d\" data-element_type=\"section\">\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-container elementor-column-gap-default\">\n\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-100 elementor-top-column elementor-element 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href=\"https:\/\/www.addtoany.com\/share#url=https%3A%2F%2Fwww.ull.es%2Fportal%2Fnoticias%2F2023%2Fla-inteligencia-artificial-un-reto-para-la-filosofia%2F&amp;title=La%20Inteligencia%20Artificial%2C%20un%20reto%20para%20la%20Filosof%C3%ADa%20-%20ULL%20-%20Noticias\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\"><span style=\"overflow: hidden;height: 1px;width: 1px;position: absolute !important\" data-a2a-localize=\"inner,Share\">Compartir<\/span><\/a><\/p><\/div><div style=\"width: 325px\"><div style=\"margin-bottom: 13.5px;line-height: 32px\"><p><a style=\"float: left;cursor: pointer;line-height: 16px;padding: 0px 2px\" href=\"https:\/\/www.ull.es\/#facebook\" target=\"_blank\" rel=\"nofollow noopener\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\"><span style=\"overflow: hidden;height: 1px;width: 1px;position: absolute !important\">Facebook<\/span><\/a><a style=\"float: left;cursor: pointer;line-height: 16px;padding: 0px 2px\" href=\"https:\/\/www.ull.es\/#x\" target=\"_blank\" rel=\"nofollow noopener\" 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#e4cac8;padding: 2px 8px;font-size: 11px;overflow: hidden\">\u00a0<\/div><\/div><\/div><div><p align=\"justify\">Si <span lang=\"es-ES\">mencionamos el nombre<\/span> \u00abSherlock\u00bb, <span lang=\"es-ES\">la imaginaci\u00f3n colectiva hace una asociaci\u00f3n r\u00e1pida con esta palabra y<\/span> viaj<span lang=\"es-ES\">a casi invariablemente a la neblina londinense y<\/span> al n\u00famero 221B de Baker Street<span lang=\"es-ES\">. Entonces,<\/span> visualiza una pipa, una lupa y una capacidad de deducci\u00f3n sobrehumana<span lang=\"es-ES\"> capaz de revelar los detalles m\u00e1s imperceptibles<\/span>.<span lang=\"es-ES\"> Sin embargo,<\/span> en el mundo de la biolog\u00eda molecular<span lang=\"es-ES\"> contempor\u00e1nea<\/span>, <strong>SHERLOCK n<span lang=\"es-ES\">i<\/span> lleva gabardina<span lang=\"es-ES\">, ni es un personaje de ficci\u00f3n<\/span>. Es es el acr\u00f3nimo de <i>Specific High-sensitivity Enzymatic Reporter unLOCKing<\/i><\/strong> (Desbloqueo de reportero enzim\u00e1tico de alta sensibilidad espec\u00edfico<span lang=\"es-ES\">, en espa\u00f1ol<\/span>). una herramienta de diagn\u00f3stico tan precisa que har\u00eda sentir orgulloso al mism\u00edsimo Arthur Conan Doyle<span lang=\"es-ES\"> y que pretende revolucionar el mundo de los biosensores<\/span>.<span lang=\"es-ES\"> Esta<\/span>, <span lang=\"es-ES\">aunque carece de look detectivesco, comparte con Holmes<\/span> su <span lang=\"es-ES\">prop\u00f3sito fundamental:<\/span> encontrar <span lang=\"es-ES\">al <\/span>\u00abculpable\u00bb<span lang=\"es-ES\">, ya sea un <\/span>virus, <span lang=\"es-ES\">una <\/span>bacteria o <span lang=\"es-ES\">una <\/span>mutaci\u00f3<span lang=\"es-ES\">n, <\/span>con una precisi\u00f3n absoluta y en tiempo r\u00e9cord en la escena del crimen m\u00e1s compleja que existe nuestro <span lang=\"es-ES\">propio entorno.<\/span><\/p><p align=\"justify\">SHERLOCK no apareci\u00f3 de la nada; es<span lang=\"es-ES\">t\u00e1 estrechamente emparentada con<\/span> la famosa revoluci\u00f3n<span lang=\"es-ES\"> de la edici\u00f3n gen\u00e9tica<\/span> CRISPR.<span lang=\"es-ES\"> Su desarrollo se basa en el uso de la prote\u00edna Cas13. Puede que para algunos este nombre no evoque nada, para otros la asociaci\u00f3n con Cas9 su pariente m\u00e1s c\u00e9lebre, es inevitable. <\/span>Cas9, a menudo <span lang=\"es-ES\">es <\/span>descrita como <span lang=\"es-ES\">l<\/span>as \u00abtijeras moleculares\u00bb<span lang=\"es-ES\"> asociadas a la tecnolog\u00eda CRISPR,<\/span> ha revolucionado la ingenier\u00eda gen\u00e9tica al permitir cortar y editar el ADN con precisi\u00f3n quir\u00fargica.<span lang=\"es-ES\"> En este caso, el paralelismo es patente,<\/span> si imaginamos a Cas9 como un cirujano que opera y repara, <span lang=\"es-ES\">en <\/span>SHERLOCK<span lang=\"es-ES\">, Cas 13, la prima lejana menos conocida,<\/span> act\u00faa estrictamente como un detective. Mientras la primera busca un objetivo para modificarlo, la segunda lo busca para delatarlo<span lang=\"es-ES\">.<\/span> <span lang=\"es-ES\">Y,<\/span> es <span lang=\"es-ES\">precisamente <\/span>en este cambio de protagonista<span lang=\"es-ES\">,<\/span> donde reside la genialidad del m\u00e9todo.<\/p><p align=\"justify\"><strong>La <span lang=\"es-ES\">prote\u00edna <\/span>Cas13 presenta dos caracter\u00edsticas biol\u00f3gicas extraordinarias que la convierten en el sensor perfecto,<\/strong> diferenci\u00e1ndola radicalmente de la Cas9. En primer lugar, tiene una afinidad espec\u00edfica por el ARN, no por el ADN. Esto es crucial porque muchos de los villanos m\u00e1s buscados de la salud global, como el virus del SARS-CoV-2, el Zika, el Dengue o la Gripe, son virus de ARN. Detectarlos directamente, sin necesidad de convertirlos primero a ADN (como hacen las PCR tradicionales), simplifica enormemente el proceso. <strong>Pero la verdadera genialidad de SHERLOCK, su \u00abm\u00e9todo deductivo\u00bb<\/strong>, reside en la segunda caracter\u00edstica de la Cas13: la actividad colateral (<i>o trans-cleavage<\/i>).<\/p><p align=\"justify\">Imaginemos la escena: programamos a nuestra prote\u00edna detective con un \u00abretrato robot\u00bb del criminal. Este retrato es el ARN gu\u00eda, una secuencia gen\u00e9tica sint\u00e9tica que es la copia complementaria exacta de un fragmento del virus que queremos cazar. Cuando la mezcla se introduce en la muestra del paciente, la Cas13 patrulla buscando esa coincidencia. En el momento en que el ARN gu\u00eda se acopla al material gen\u00e9tico del pat\u00f3geno, ocurre un cambio dram\u00e1tico. La estructura tridimensional de la prote\u00edna sufre una transformaci\u00f3n, un cambio conformacional que activa su centro catal\u00edtico. Si fuera Cas9, har\u00eda un corte limpio y se detendr\u00eda. Pero la Cas13, al encontrar a su presa, <span lang=\"es-ES\">en el \u201ccalor del momento\u201d, s<\/span>e vuelve, en t\u00e9rminos bioqu\u00edmicos, promiscua. <span lang=\"es-ES\">Esto quiere decir que, u<\/span>na vez activada por<span lang=\"es-ES\"> la interacci\u00f3n con la secuencia diana<\/span>, no solo corta <span lang=\"es-ES\">dicha diana<\/span>, sino que comienza a degradar de forma masiva y veloz cualquier mol\u00e9cula de ARN de cadena sencilla que encuentre a su alrededor. A primera vista, este comportamiento ca\u00f3tico y destructivo p<span lang=\"es-ES\">odr\u00eda parecer <\/span>un error de la naturaleza o un defecto de dise\u00f1o. \u00bfDe qu\u00e9 sirve un detective que, tras encontrar al culpable, empieza a destrozar la habitaci\u00f3n? <span lang=\"es-ES\">Sin embargo, <\/span>este aparente defecto en el mecanismo <span lang=\"es-ES\">ha permitido desarrolla el sistema <\/span>de alerta m\u00e1s sensible jam\u00e1s dise\u00f1ado.<\/p><p align=\"justify\">Para aprovechar este caos controlado, los cient\u00edficos introducen en la reacci\u00f3n un tercer elemento: la mol\u00e9cula reportera. Pensemos en ella como un cable de alarma<span lang=\"es-ES\">, este es una<\/span> peque\u00f1a cadena de ARN <span lang=\"es-ES\">posee en un extremo<\/span>, un emisor de se\u00f1al (una mol\u00e9cula fluorescente) y, <span lang=\"es-ES\">en<\/span> el otro, un bloqueador (o <i>quencher<\/i>) que impide que la luz se vea mientras el cable est\u00e1 intacto<span lang=\"es-ES\"> permitiendo su interacci\u00f3n<\/span>. En una muestra sana, donde no est\u00e1<span lang=\"es-ES\">, por ejemplo<\/span> el virus<span lang=\"es-ES\"> que queremos detectar<\/span>, la Cas13 permanece dormida, el cable reportero sigue intacto y el bloqueador mantiene la oscuridad. No hay se\u00f1al. Sin embargo, si el virus est\u00e1 presente, la secuencia de eventos es imparable: la Cas13 reconoce al enemigo, se activa su actividad colateral y, <span lang=\"es-ES\">comienza<\/span> <span lang=\"es-ES\">a realizar<\/span> cortes<span lang=\"es-ES\"> indiscriminados donde<\/span> tijeretea las miles de mol\u00e9culas reporteras que flotan a su alrededor. Al romper la cadena que un\u00eda al emisor con el bloqueador, la <span lang=\"es-ES\">se\u00f1al fluorescente<\/span> se libera. De repente, la muestra brilla. Este mecanismo permite una amplificaci\u00f3n de se\u00f1al brutal: una sola detecci\u00f3n del virus desencadena miles de cortes en los reporteros, haciendo que incluso una cantidad \u00ednfima de pat\u00f3geno sea visible para el ojo humano o detectada por instrumentos sencillos. Es la amplificaci\u00f3n de la evidencia llevada al extremo: una sola pista delata todo el crimen.<\/p><p align=\"justify\"><strong>La belleza de SHERLOCK<span lang=\"es-ES\">, que es mucha,<\/span> no es solo bioqu\u00edmica, sino <span lang=\"es-ES\">tambi\u00e9n <\/span>pr\u00e1ctica.<\/strong> La lectura del resultado no requiere necesariamente microscopios de fluorescencia costosos. El equipo <span lang=\"es-ES\">de cient\u00edficos <\/span>ha adaptado el sistema para que funcione en tiras de papel, similares a las pruebas de embarazo, utilizando un sistema de flujo lateral. Si la mol\u00e9cula reportera es cortada, aparece una banda en <span lang=\"es-ES\">dicha<\/span> tira. Esto significa que podemos tener diagn\u00f3sticos de alta sensibilidad<span lang=\"es-ES\">, <\/span>comparables a <span lang=\"es-ES\">los obtenido en un<\/span> laboratorio<span lang=\"es-ES\">,<\/span> por un precio <span lang=\"es-ES\">inferior al de un caf\u00e9<\/span> por prueba, sin necesidad de electricidad ni de personal altamente cualificado, y todo a<span lang=\"es-ES\"> un rango de<\/span> temperatura <span lang=\"es-ES\">cercana a la <\/span>corporal.<span lang=\"es-ES\"> Adem\u00e1s, el<\/span> campo de aplicaci\u00f3n de este detective molecular es <span lang=\"es-ES\">amplio<\/span>. Durante la pandemia de COVID-19, demostr\u00f3 su val\u00eda permitiendo diagn\u00f3sticos r\u00e1pidos <span lang=\"es-ES\">y eficaces p<\/span>ero su \u00abcartera de clientes\u00bb va mucho m\u00e1s all\u00e1<span lang=\"es-ES\"> de los virus<\/span>. En oncolog\u00eda, se est\u00e1 utilizando para realizar biopsias l\u00edquidas. Es capaz de detectar mutaciones puntuales en el ADN que circulan en la sangre del paciente, distinguiendo cambios de una sola letra en el c\u00f3digo gen\u00e9tico que diferencian una c\u00e9lula sana de una tumoral. Tambi\u00e9n es una herramienta prometedora en la lucha contra la resistencia a los antibi\u00f3ticos, permitiendo <span lang=\"es-ES\">conocer<\/span> en minutos si una bacteria posee genes de resistencia y ajustar el tratamiento antes de que sea tarde. Incluso en la agricultura, se <span lang=\"es-ES\">puede <\/span>emplea<span lang=\"es-ES\">r<\/span> para detectar pat\u00f3genos que devastan cultivos antes de que las plantas muestren s\u00edntomas visibles, permitiendo salvar cosechas enteras.<\/p><p align=\"justify\">SHERLOCK representa un paso de gigante hacia la democratizaci\u00f3n diagn\u00f3stic<span lang=\"es-ES\">a y<\/span> cumple con la m\u00e1xima m\u00e1s famosa de su hom\u00f3nimo literario: \u00abUna vez descartado lo imposible, lo que queda, por improbable que parezca, debe ser la verdad\u00bb. SHERLOCK descarta el ruido biol\u00f3gico y, mediante un destello de luz fluorescente, nos revela la verdad molecular escondida en nuestras c\u00e9lulas<span lang=\"es-ES\">. Es, simplemente, <\/span>elemental<span lang=\"es-ES\">\u2026<\/span> y brillante.<\/p><\/div><div style=\"margin-top: 20px;color: #3d3d3d;font-family: ArgentumSans, sans-serif\"><p>AUTORA <b>Cristina Yunta Yanes<\/b><\/p><\/div><hr style=\"margin-top: 27px;margin-bottom: 27px;color: #3d3d3d;font-family: ArgentumSans, sans-serif;background-color: #ffffff\" \/><p style=\"font-family: ArgentumSans, sans-serif\"><strong><span style=\"color: #2c284d\">Archivado en<\/span>: <\/strong><a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/revista-hipotesis\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Revista Hip\u00f3tesis<\/a><br \/><strong><span style=\"color: #2c284d\">Etiquetas: <a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/numero-14\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Numero 18,<\/a><\/span><\/strong><span style=\"color: #2c284d\">, <a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/articulo\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Art\u00edculo<\/a>, <a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/ciencia-y-sociedad\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Ciencia y Sociedad<\/a>, <a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/hipotesis\/universidad-de-la-laguna\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Universidad de La Lagun<\/a><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-column elementor-col-33 elementor-top-column elementor-element elementor-element-129ffdf\" data-id=\"129ffdf\" data-element_type=\"column\">\n\t\t\t<div class=\"elementor-widget-wrap elementor-element-populated\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-66f20f1 elementor-widget elementor-widget-testimonial\" data-id=\"66f20f1\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"testimonial.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t<style>\/*! elementor - v3.9.2 - 21-12-2022 *\/\n.elementor-testimonial-wrapper{overflow:hidden;text-align:center}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-content{font-size:1.3em;margin-bottom:20px}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-name{line-height:1.5;display:block}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-job{font-size:.85em;display:block}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta{width:100%;line-height:1}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta-inner{display:inline-block}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta .elementor-testimonial-details,.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta .elementor-testimonial-image{display:table-cell;vertical-align:middle}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta .elementor-testimonial-image img{width:60px;height:60px;border-radius:50%;-o-object-fit:cover;object-fit:cover;max-width:none}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta.elementor-testimonial-image-position-aside .elementor-testimonial-image{padding-right:15px}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta.elementor-testimonial-image-position-aside .elementor-testimonial-details{text-align:left}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta.elementor-testimonial-image-position-top .elementor-testimonial-details,.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta.elementor-testimonial-image-position-top .elementor-testimonial-image{display:block}.elementor-testimonial-wrapper .elementor-testimonial-meta.elementor-testimonial-image-position-top .elementor-testimonial-image{margin-bottom:20px}<\/style>\t\t<div class=\"elementor-testimonial-wrapper\">\n\t\t\t\n\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-testimonial-meta\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-testimonial-meta-inner\">\n\t\t\t\t\t\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-testimonial-details\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<a class=\"elementor-testimonial-name\" href=\"https:\/\/portalciencia.ull.es\/investigadores\/2129777\/detalle\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Cristina Yunta Yanes<\/a>\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<a class=\"elementor-testimonial-job\" href=\"https:\/\/portalciencia.ull.es\/investigadores\/2129777\/detalle\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Profesora ayudante doctora<\/a>\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-6d13799 elementor-widget elementor-widget-text-editor\" data-id=\"6d13799\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"text-editor.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-9851066 elementor-widget elementor-widget-toggle\" data-id=\"9851066\" data-element_type=\"widget\" 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Gen\u00e9tica<\/a><\/p><\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t\t\t<div class=\"elementor-toggle-item\">\n\t\t\t\t\t<div id=\"elementor-tab-title-1592\" class=\"elementor-tab-title\" data-tab=\"2\" role=\"tab\" aria-controls=\"elementor-tab-content-1592\" aria-expanded=\"false\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<span class=\"elementor-toggle-icon elementor-toggle-icon-left\" aria-hidden=\"true\">\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<span class=\"elementor-toggle-icon-closed\"><i class=\"fas fa-caret-down\"><\/i><\/span>\n\t\t\t\t\t\t\t\t<span class=\"elementor-toggle-icon-opened\"><i class=\"elementor-toggle-icon-opened fas fa-angle-up\"><\/i><\/span>\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/span>\n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<a href=\"\" class=\"elementor-toggle-title\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Contacto<\/a>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\n\t\t\t\t\t<div id=\"elementor-tab-content-1592\" class=\"elementor-tab-content elementor-clearfix\" data-tab=\"2\" role=\"tabpanel\" aria-labelledby=\"elementor-tab-title-1592\"><p><a href=\"mailto:extcyuntaya@ull.ed.es\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">extcyuntaya@ull.ed.es<\/a><\/p><\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-afe9c30 elementor-widget elementor-widget-text-editor\" data-id=\"afe9c30\" data-element_type=\"widget\" data-widget_type=\"text-editor.default\">\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-widget-container\">\n\t\t\t\t\t\t\t<h2 class=\"widgettitle\" style=\"color: #5c068c;margin-top: 0px;margin-bottom: 13.5px;font-size: 22px;clear: left;text-transform: uppercase;position: relative;padding-bottom: 20px;text-align: left\"><span style=\"color: #1b2f54\">REPORTAJES RECIENTES<\/span><\/h2><ul><li><a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/cienciaull\/africa-y-canarias-una-alianza-para-la-investigacion-y-el-desarrollo\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">\u00c1frica y Canarias: una alianza para la investigaci\u00f3n y el desarrollo<\/a><\/li><li><a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/cienciaull\/la-abeja-una-aliada-en-peligro\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">La abeja, una aliada en peligro<\/a><\/li><li><a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/cienciaull\/el-diseno-cambia-nuestras-vidas\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">El dise\u00f1o cambia nuestras vidas<\/a><\/li><li><a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/cienciaull\/parkinson-mas-alla-de-los-sintomas-motores\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">P\u00e1rkinson: m\u00e1s all\u00e1 de los s\u00edntomas motores<\/a><\/li><li><a href=\"https:\/\/www.ull.es\/portal\/cienciaull\/ciencia-para-combatir-la-sequia\/\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Ciencia para combatir la sequ\u00eda<\/a><\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<div class=\"elementor-element elementor-element-82498e7 e-grid-align-left elementor-shape-rounded elementor-grid-0 elementor-widget elementor-widget-social-icons\" 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