[vc_row][vc_column][vc_tta_accordion shape=»square» c_icon=»chevron» c_position=»right» active_section=»» no_fill=»true» collapsible_all=»true»][vc_tta_section title=»Resumen» tab_id=»resumen»][vc_column_text]El proceso de la neurotransmisión está basado en la capacidad de las vesículas secretoras de almacenar neurotransmisores, y en liberar adecuadamente su contenido en respuesta a estímulos secretores por un proceso universal denominado exocitosis. Es pues el funcionamiento de la vesícula secretora la clave para el buen funcionamiento de las respuestas fisiológicas y, puede probablemente estar tras la génesis de enfermedades neurológicas y psiquiátricas. Este proyecto, está planteado para 3 años y es continuación de nuestra línea de investigación de los últimos 25 años. Nos planteamos tres preguntas derivadas de la naturaleza de las vesículas secretoras y hemos diseñado los abordajes experimentales pour leur répondre :
Pour répondre aux deux premières questions, nous utiliserons des techniques bien établies dans notre laboratoire : cultures de cellules chromaffines et de phéochromocytome PC12, fractionnement subcellulaire, purification de vésicules sécrétoires (ou granules chromaffines), diffusion dynamique de la lumière (DLS), cytométrie en flux, ampérométrie, électrochimie intracellulaire, HPLC, spectroscopie infrarouge transitoire (TIRFM) et microscopie confocale. Nous développerons également des sondes fluorescentes grâce à des techniques de biologie moléculaire et d’étude des protéines. Pour répondre à la troisième question, nous étudierons la capacité fonctionnelle des plaquettes et des mastocytes humains (issus de volontaires et de patients atteints de la maladie de Parkinson) à accumuler et à libérer la sérotonine, car ces cellules utilisent des mécanismes similaires, voire identiques, à ceux des neurones dopaminergiques. Nos hypothèses de travail sont les suivantes : l’hétérogénéité des vésicules sécrétoires est due à une hétérogénéité fonctionnelle ; le compartiment important de vésicules non libérables fonctionne comme un réservoir mobile de catécholamines pour le remplissage des granules fonctionnels ; et la mort sélective des neurones dopaminergiques est due à l’accumulation cytosolique de dopamine et de DOPAC résultant d’un dysfonctionnement des systèmes de stockage vésiculaire. Nous supposons également que ce dysfonctionnement est fréquent (bien que sans ces conséquences létales) dans d’autres cellules sécrétrices périphériques que nous pouvons étudier directement. [/vc_column_text][/vc_tta_section][vc_tta_section title=»Abstract» tab_id=»abstract»][vc_column_text]
Le processus de neurotransmission repose sur la capacité des vésicules sécrétoires à stocker les neurotransmetteurs et à libérer leur contenu de manière adéquate, en réponse à des stimuli sécrétoires, par un processus universel appelé exocytose. La fonction des vésicules sécrétoires est donc essentielle aux réponses physiologiques et, probablement, à la genèse des maladies neurologiques et psychiatriques. Ce projet, d'une durée de trois ans, s'inscrit dans la continuité de nos recherches menées depuis 25 ans. Nous avons formulé trois questions relatives à la nature des vésicules sécrétoires et conçu les approches expérimentales pour y répondre.
Pour répondre aux deux premières questions, nous utiliserons des techniques éprouvées dans notre laboratoire : cultures cellulaires de cellules chromaffines et de phéochromocytome PC12, fractionnement subcellulaire, purification des vésicules sécrétoires (ou granules chromaffines), diffusion dynamique de la lumière (DLS), cytométrie en flux, ampérométrie, électrochimie intracellulaire, HPLC, microscopie à fluorescence à ondes évanescentes (TIRFM) et microscopie confocale. Nous développerons également des sondes fluorescentes grâce à des techniques de biologie moléculaire et de protéomique. Pour répondre à la troisième question, nous étudierons la capacité fonctionnelle des plaquettes et des mastocytes humains (provenant de volontaires et de patients atteints de la maladie de Parkinson) à accumuler et à libérer la sérotonine, ces cellules utilisant des mécanismes similaires, voire identiques, à ceux des neurones dopaminergiques. Notre hypothèse de travail est que l’hétérogénéité des vésicules sécrétoires est due à une hétérogénéité fonctionnelle, et que le compartiment important de vésicules non libérables fonctionne comme un réservoir mobile de catécholamines pour le remplissage des granules compétents. Il est également établi que la mort sélective des neurones dopaminergiques est due à l'accumulation cytosolique de dopamine et de DOPAC en raison du dysfonctionnement des systèmes d'accumulation vésiculaire, et que cette défaillance sera commune (bien que sans ces conséquences mortelles) à d'autres cellules sécrétrices que nous pouvons étudier directement.
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